2 × ടാക് പ്ലാറ്റിനം പിസിആർ മിക്സ്

അൾട്രാ-പ്യുവർ ഹോട്ട്സ്റ്റാർട്ട് ഹൈ-ഫിഡിലിറ്റി തെർമോസ്റ്റബിൾ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്.

3′-5 ′ എക്സോ ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനവും 5′-3 ′ എക്സോ ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനവും ഉള്ള ഒരു രാസ-പരിഷ്കരിച്ച ഹോട്ട്സ്റ്റാർട്ട് ടാക് പോളിമറേസ് ആണ് ടാക് പ്ലാറ്റിനം ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്. ടാക് പ്ലാറ്റിനം ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിന്റെ എൻസൈം പ്രവർത്തനം roomഷ്മാവിൽ തടഞ്ഞു. അതിന്റെ പ്രവർത്തനം 94 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 5-10 മിനിറ്റ് ചൂടാക്കിയതിനുശേഷം മാത്രമേ സജീവമാകൂ പിസിആർ പ്രതികരണത്തിന്റെ പ്രത്യേകതയും. കൂടാതെ, ടാക് പ്ലാറ്റിനം ഡിഎൻഎ പോളിമറെയ്സിന് വളരെ ഉയർന്ന വിശ്വാസ്യതയുണ്ട്, ഇത് പിഫു പോളിമറേസിനേക്കാൾ മികച്ചതാണ്. ഡി‌എൻ‌എ പോളിമറൈസേഷന്റെ വിപുലീകരണ വേഗത പി‌എഫ്‌യു പോളിമറേസിനേക്കാൾ വേഗതയുള്ളതാണ്, കൂടാതെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത കൂടുതലാണ്.

പൂച്ച ഇല്ല	പാക്കിംഗ് വലുപ്പം
4992789	5x1 മില്ലി
4992790	5 × 1 മില്ലി

ഞങ്ങൾക്ക് ഇമെയിൽ അയയ്ക്കുക

ഉൽപ്പന്ന വിശദാംശം

പരീക്ഷണാത്മക ഉദാഹരണം

പതിവുചോദ്യങ്ങൾ

ഉൽപ്പന്ന ടാഗുകൾ

പ്രവർത്തന നിർവ്വചനം

1 യൂണിറ്റ് (യു) ടാക് പ്ലാറ്റിനം ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് പ്രവർത്തനം 10 എൻഎംഒൽ ഡയോക്സി ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ 74 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 74 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ സജീവമാക്കിയ സാൽമൺ ബീജ ഡിഎൻഎ ഉപയോഗിച്ച് ടെംപ്ലേറ്റ്/പ്രൈമറായി ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് ആവശ്യമായ എൻസൈമിന്റെ അളവാണ്.

ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം

SDS-PAGE കണ്ടെത്തലിന്റെ ശുദ്ധി 99%ൽ കൂടുതലാണ്; എക്സോജെനസ് ന്യൂക്ലീസിന്റെ പ്രവർത്തനങ്ങളൊന്നും കണ്ടെത്തിയില്ല; മനുഷ്യ ജീനോമിലെ ഒറ്റ-പകർപ്പ് ജീൻ ഫലപ്രദമായി വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും; ഒരാഴ്ച roomഷ്മാവിൽ സൂക്ഷിക്കുമ്പോൾ കാര്യമായ പ്രവർത്തന മാറ്റമില്ല.

പ്രധാന സാങ്കേതിക പാരാമീറ്ററുകൾ

ഇതിന് 5′-3 ′ എക്സോ ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനവും 3′-5 ′ എക്സോണൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനവുമുണ്ട്, കൂടാതെ അതിന്റെ വിശ്വസ്തത Pfu പോളിമറേസിന് അടുത്താണ്. ടാക് പ്ലാറ്റിനം പോളിമറേസിന്റെ വിപുലീകരണ വേഗത Pfu പോളിമറേസിനേക്കാൾ വേഗതയുള്ളതാണ്, ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത കൂടുതലാണ്. പിസിആർ ഉൽ‌പ്പന്നങ്ങൾ മങ്ങിയ അറ്റത്തേക്ക് നേരിട്ട് ബന്ധിപ്പിക്കാം അല്ലെങ്കിൽ ടി‌എ വെക്റ്റർ ഉപയോഗിച്ച് ക്ലോൺ ചെയ്യാം. ക്ലോണിംഗ് കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തേണ്ടതുണ്ടെങ്കിൽ, ടിഎ വെക്റ്ററിലേക്ക് ക്ലോൺ ചെയ്യുന്നതിന് മുമ്പ് ആദ്യം ശുദ്ധീകരിക്കാനും 3'-dA ഓവർഹാംഗുകൾ ചേർക്കാനും ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

വൺ-ട്യൂബ് ടാക് പ്ലാറ്റിനം മാസ്റ്റർമിക്സ് (നാഷണൽ ഹൈ-ടെക് ഉൽപ്പന്ന സർട്ടിഫിക്കേഷൻ)

Q ടാക് പ്ലാറ്റിനം മാസ്റ്റർമിക്സ് പിസിആർ പ്രതികരണത്തിന്റെ പ്രത്യേകതയും സംവേദനക്ഷമതയും മെച്ചപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട് കൂടാതെ ഉയർന്ന ജിസി ഉള്ളടക്കവും ദ്വിതീയ ഘടനയും പോലുള്ള സങ്കീർണ്ണ ടെംപ്ലേറ്റുകൾ വർദ്ധിപ്പിക്കാനും കഴിയും. ടാർഗെറ്റുചെയ്‌ത ടെംപ്ലേറ്റിന്റെ 2 പകർപ്പുകൾ വരെ വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും, കൂടുതൽ കൃത്യമായ പരീക്ഷണ ഫലങ്ങൾ ഉറപ്പാക്കുന്നു.

■ അതുല്യമായ Taq Platinum MasterMix ഫോർമുല മുഴുവൻ പ്രതികരണ സംവിധാനത്തെയും വളരെ സുസ്ഥിരമാക്കുന്നു, കൂടാതെ 4 ° C- ൽ ആവർത്തിച്ചുള്ള ഫ്രീസ്-ലോ അല്ലെങ്കിൽ ദീർഘകാല സംഭരണം പ്രവർത്തനത്തെ ബാധിക്കില്ല.

Stable സുസ്ഥിരവും കാര്യക്ഷമവുമായ മുൻകൂട്ടി തയ്യാറാക്കിയ പിസിആർ മിക്സഡ് സൊല്യൂഷന് പ്രവർത്തനം വേഗത്തിലും ലളിതമാക്കാനും കഴിയും, ഇത് തൊഴിൽ തീവ്രതയും സാമ്പിൾ പിശകും വളരെയധികം കുറയ്ക്കുന്നു. ഹൈ-പെർഫോമൻസ് പിസിആർ എൻഹാൻസർ, ഒപ്റ്റിമൈസർ എന്നിവയും മിശ്രിതത്തിൽ ഉൾപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്, ഇത് പിസിആർ വ്യവസ്ഥകളിലെ ആവശ്യകതകൾ കുറയ്ക്കുന്നു.

ഈ ഉൽപ്പന്നത്തിന് ഡൈ അടങ്ങിയതും ഡൈ-ഫ്രീ സംവിധാനങ്ങളുമുണ്ട്. ഡൈ അടങ്ങിയ മാസ്റ്റർമിക്സ് ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ പിസിആറിന് ശേഷം നേരിട്ട് ഇലക്ട്രോഫോറെസ് ചെയ്യാവുന്നതാണ്, ലോഡിംഗ് ബഫർ ചേർക്കാതെ.

അപേക്ഷകൾ

ജീനോമുകൾ പോലുള്ള സങ്കീർണ്ണമായ ടെംപ്ലേറ്റുകളിൽ നിന്ന് ഉയർന്ന വിശ്വാസ്യതയുള്ള ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് ഇതിന് Pfu പോളിമറേസ് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കാൻ കഴിയും, കൂടാതെ എക്സ്പ്രഷൻ ജീനുകളുടെ ക്ലോണിംഗ്, സൈറ്റ്-നിർദ്ദിഷ്ട മ്യൂട്ടേഷനുകൾ, സിംഗിൾ ന്യൂക്ലിയോടൈഡ് പോളിമോർഫിസം (SNP) എന്നിവയുടെ വിശകലനം പോലുള്ള ആപ്ലിക്കേഷനുകൾക്ക് ഇത് അനുയോജ്യമാണ്.

പിസിആർ പ്രൈമറുകൾ രൂപകൽപ്പന ചെയ്യുന്നതിനുള്ള മുൻകരുതലുകൾ:

പ്രൈമർ ദൈർഘ്യം സാധാരണയായി 20-25 മെർ ആണ്. എന്നിരുന്നാലും, നീണ്ട ശകലം പിസിആർ നടത്തുമ്പോൾ, പ്രൈമർ ദൈർഘ്യം 30-35 മെർ ആയി ഉയർത്തണം.

Pri രണ്ട് പ്രൈമറുകൾക്കിടയിൽ പരസ്പര പൂരക ജോഡിയൊന്നുമില്ല, പ്രത്യേകിച്ചും 3. അറ്റത്തുള്ള അവസാന 3 ബേസുകൾക്ക്.

C GC ഉള്ളടക്കം 50-60%ആയിരിക്കണം, കൂടാതെ പ്രാദേശിക സമ്പന്നമായ GC അല്ലെങ്കിൽ AT ഒഴിവാക്കുക. പ്രൈമറും ടെംപ്ലേറ്റും സുസ്ഥിരമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിന്, 3. അറ്റത്ത് സമ്പന്നമായ ഘടന ഒഴിവാക്കുക.

Secondary ദ്വിതീയ ഘടന ഉണ്ടാക്കാൻ പ്രൈമർ ഒഴിവാക്കുക.

M പരസ്പരം അടുത്ത് Tm താപനിലയുള്ള രണ്ട് പ്രൈമറുകൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുക.

പിസിആറിനായുള്ള പ്രൈമറുകളുടെ ടിഎം മൂല്യത്തിന്റെ കണക്കുകൂട്ടൽ:

പ്രൈമർ 20 മെറിൽ കുറവാണെങ്കിൽ: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).

Mer പ്രൈമർ 20 മെറിൽ കൂടുതലാകുമ്പോൾ: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, ഇവിടെ L എന്നത് പ്രൈമറിന്റെ ദൈർഘ്യമാണ്.

Ne അനിയലിംഗ് താപനില (Tm-5) ° C ആയി സജ്ജമാക്കുക.

പിസിആർ പ്രൈമർ ഇൻപുട്ട്

പ്രൈമറുകളുടെ ഉചിതമായ അന്തിമ സാന്ദ്രത 0.1 μM നും 1.0 μM നും ഇടയിൽ തിരഞ്ഞെടുക്കാവുന്നതാണ്. വളരെ കുറഞ്ഞ പ്രൈമർ സാന്ദ്രത ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ കുറഞ്ഞ വിളവിന് കാരണമാകുന്നു, അതേസമയം വളരെ ഉയർന്ന പ്രൈമർ സാന്ദ്രത നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ആംപ്ലിഫിക്കേഷന് കൂടുതൽ സാധ്യതയുണ്ട്. സാധാരണയായി, ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎയുടെ അളവ് വലുതോ സങ്കീർണ്ണമോ ആയ ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ (മനുഷ്യ ജീനോം ഡിഎൻഎ പോലുള്ളവ) ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, പ്രൈമർ സാന്ദ്രത കുറവായിരിക്കണം. ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎയുടെ അളവ് ചെറുതോ ലളിതമോ ആയ ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ (ഉദാ. പ്ലാസ്മിഡ് ഡിഎൻഎ മുതലായവ) ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, പ്രൈമർ സാന്ദ്രത കൂടുതലായിരിക്കണം.

എല്ലാ ഉൽപ്പന്നങ്ങളും ODM/OEM- നായി ഇച്ഛാനുസൃതമാക്കാൻ കഴിയും. വിശദാംശങ്ങൾക്ക്,കസ്റ്റമൈസ്ഡ് സർവീസ് (ODM/OEM) ക്ലിക്ക് ചെയ്യുക

മുമ്പത്തെ: 2 × HotStart Taq PCR മിക്സ്

അടുത്തത്: 2 × ടാക് പ്ലസ് പിസിആർ മിക്സ്

1 കെബി ശകലം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് ടെംപ്ലേറ്റായി ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ ഉപയോഗിക്കുക. പിസിആർ പ്രതികരണത്തിന് ശേഷം, ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് കണ്ടെത്തുന്നതിന് 5 μl എടുക്കുക.

ചോദ്യം: ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബാൻഡുകളൊന്നുമില്ല

A-1 ടെംപ്ലേറ്റ്

ടെംപ്ലേറ്റിൽ പ്രോട്ടീൻ മാലിന്യങ്ങൾ അല്ലെങ്കിൽ ടാക് ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ മുതലായവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു - ഡിഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ് ശുദ്ധീകരിക്കുക, പ്രോട്ടീൻ മാലിന്യങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്യുക അല്ലെങ്കിൽ ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്റ്റ് ചെയ്യുക.

Temp ടെംപ്ലേറ്റ് ഡീനാറ്ററേഷൻ പൂർത്തിയായിട്ടില്ല —— ഉചിതമായി ഡിനാറ്ററേഷൻ താപനില വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ഡീനാറ്ററേഷൻ സമയം ദീർഘിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

Mp ടെംപ്ലേറ്റ് ഡീഗ്രഡേഷൻ —— ടെംപ്ലേറ്റ് വീണ്ടും തയ്യാറാക്കുക.

എ -2 പ്രൈമർ

Pri പ്രൈമറുകളുടെ മോശം നിലവാരം —— പ്രൈമർ വീണ്ടും സമന്വയിപ്പിക്കുക.

Mer പ്രൈമർ ഡീഗ്രഡേഷൻ —— സംരക്ഷണത്തിനായി ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയുള്ള പ്രൈമറുകൾ ചെറിയ അളവിലേക്ക് മാറ്റുക. ഒന്നിലധികം മരവിപ്പിക്കൽ, ഉരുകൽ അല്ലെങ്കിൽ ദീർഘകാല 4 ° C ക്രയോപ്രെസർവ്ഡ് എന്നിവ ഒഴിവാക്കുക.

Pri പ്രൈമറുകളുടെ തെറ്റായ ഡിസൈൻ (ഉദാ: പ്രൈമർ ദൈർഘ്യം പോരാ

A-3 Mg²⁺ഏകാഗ്രത

G എംജി²⁺ ഏകാഗ്രത വളരെ കുറവാണ് —— Mg കൃത്യമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുക²⁺ഏകാഗ്രത: Mg ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക²⁺ ഒപ്റ്റിമൽ Mg നിർണ്ണയിക്കാൻ 0.5 mM ഇടവേളയിൽ 1 mM മുതൽ 3 mM വരെയുള്ള പ്രതികരണങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പരയിലൂടെ ഏകാഗ്രത²⁺ ഓരോ ടെംപ്ലേറ്റിനും പ്രൈമറിനുമുള്ള ഏകാഗ്രത.

A-4 അനിയലിംഗ് താപനില

An ഉയർന്ന അനിയലിംഗ് താപനില പ്രൈമറിന്റെയും ടെംപ്ലേറ്റിന്റെയും ബൈൻഡിംഗിനെ ബാധിക്കുന്നു. —— അനിയലിംഗ് താപനില കുറയ്ക്കുകയും 2 ° C ഗ്രേഡിയന്റ് ഉപയോഗിച്ച് അവസ്ഥ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുകയും ചെയ്യുക.

A-5 വിപുലീകരണ സമയം

Extension ഹ്രസ്വ വിപുലീകരണ സമയം —— വിപുലീകരണ സമയം വർദ്ധിപ്പിക്കുക.

ചോദ്യം: തെറ്റായ പോസിറ്റീവ്

പ്രതിഭാസം: നെഗറ്റീവ് സാമ്പിളുകളും ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസ് ബാൻഡുകൾ കാണിക്കുന്നു.

പിസിആറിന്റെ എ -1 മലിനീകരണം

Target ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസ് അല്ലെങ്കിൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ ക്രോസ് മലിനീകരണം —— നെഗറ്റീവ് സാമ്പിളിൽ ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസ് അടങ്ങിയ സാമ്പിൾ പൈപ്പ് ചെയ്യരുത് അല്ലെങ്കിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിൽ നിന്ന് പുറത്തേക്ക് ഒഴിക്കരുത്. നിലവിലുള്ള ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ ഇല്ലാതാക്കാൻ റിയാക്ടറുകളോ ഉപകരണങ്ങളോ ഓട്ടോക്ലേവ് ചെയ്യണം, കൂടാതെ നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണ പരീക്ഷണങ്ങളിലൂടെ മലിനീകരണത്തിന്റെ അസ്തിത്വം നിർണ്ണയിക്കണം.

Ag റിയാജന്റ് മലിനീകരണം —— റിയാക്ടറുകളോട് ചേർന്ന് കുറഞ്ഞ താപനിലയിൽ സൂക്ഷിക്കുക.

എ -2 പ്രൈംr

G എംജി²⁺ ഏകാഗ്രത വളരെ കുറവാണ് —— Mg കൃത്യമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുക²⁺ ഏകാഗ്രത: Mg ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക²⁺ ഒപ്റ്റിമൽ Mg നിർണ്ണയിക്കാൻ 0.5 mM ഇടവേളയിൽ 1 mM മുതൽ 3 mM വരെയുള്ള പ്രതികരണങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പരയിലൂടെ ഏകാഗ്രത²⁺ ഓരോ ടെംപ്ലേറ്റിനും പ്രൈമറിനുമുള്ള ഏകാഗ്രത.

Pri തെറ്റായ പ്രൈമർ ഡിസൈൻ, ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസിന് നോൺ-ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസുമായി ഹോമോളജി ഉണ്ട്. —— പ്രൈമറുകൾ വീണ്ടും രൂപകൽപ്പന ചെയ്യുക.

ചോദ്യം: നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ

പ്രതിഭാസം: പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബാൻഡുകൾ പ്രതീക്ഷിക്കുന്ന വലുപ്പവുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നില്ല, വലുതോ ചെറുതോ അല്ലെങ്കിൽ ചിലപ്പോൾ നിർദ്ദിഷ്ട ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബാൻഡുകളും നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബാൻഡുകളും സംഭവിക്കുന്നു.

എ -1 പ്രൈമർ

Pri മോശം പ്രൈമർ പ്രത്യേകത

—— റീ-ഡിസൈൻ പ്രൈമർ.

Mer പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ വളരെ കൂടുതലാണ് —— ഡിനാറ്ററേഷൻ താപനില കൃത്യമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ഡിനാറ്ററേഷൻ സമയം ദീർഘിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

A-2 Mg²⁺ ഏകാഗ്രത

എംജി²⁺ ഏകാഗ്രത വളരെ കൂടുതലാണ് —— Mg2+ ഏകാഗ്രത ശരിയായി കുറയ്ക്കുക: Mg ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക²⁺ ഒപ്റ്റിമൽ Mg നിർണ്ണയിക്കാൻ 0.5 mM ഇടവേളയിൽ 1 mM മുതൽ 3 mM വരെയുള്ള പ്രതികരണങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പരയിലൂടെ ഏകാഗ്രത²⁺ ഓരോ ടെംപ്ലേറ്റിനും പ്രൈമറിനുമുള്ള ഏകാഗ്രത.

എ -3 തെർമോസ്റ്റബിൾ പോളിമറേസ്

En അമിതമായ എൻസൈം തുക —— 0.5 U ഇടവേളകളിൽ ഉചിതമായ എൻസൈം തുക കുറയ്ക്കുക.

A-4 അനിയലിംഗ് താപനില

Ne അനിയലിംഗ് താപനില വളരെ കുറവാണ് —— അനുചിതമായ താപനില വർദ്ധിപ്പിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ രണ്ട്-ഘട്ട അനിയലിംഗ് രീതി സ്വീകരിക്കുക

A-5 PCR സൈക്കിളുകൾ

P വളരെയധികം PCR സൈക്കിളുകൾ —— PCR സൈക്കിളുകളുടെ എണ്ണം കുറയ്ക്കുക.

ചോദ്യം: പാച്ചിയോ സ്മിയർ ബാൻഡുകളോ

എ -1 പ്രൈമർ———————————————————————————————————————————————————————————————————— അല്ലെങ്കിൽ കൂടുകൂട്ടിയ PCR നടത്തുക.

എ -2 ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ

ടെംപ്ലേറ്റ് ശുദ്ധമല്ല - ടെംപ്ലേറ്റ് ശുദ്ധീകരിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ ഡിഎൻഎയെ ശുദ്ധീകരണ കിറ്റുകൾ ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിച്ചെടുക്കുക.

A-3 Mg²⁺ ഏകാഗ്രത

——Mg²⁺ ഏകാഗ്രത വളരെ കൂടുതലാണ് —— Mg ശരിയായി കുറയ്ക്കുക²⁺ ഏകാഗ്രത: Mg ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക²⁺ ഒപ്റ്റിമൽ Mg നിർണ്ണയിക്കാൻ 0.5 mM ഇടവേളയിൽ 1 mM മുതൽ 3 mM വരെയുള്ള പ്രതികരണങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പരയിലൂടെ ഏകാഗ്രത²⁺ ഓരോ ടെംപ്ലേറ്റിനും പ്രൈമറിനുമുള്ള ഏകാഗ്രത.

A-4 dNTP

——DNTP- യുടെ സാന്ദ്രത വളരെ കൂടുതലാണ് —— dNTP- യുടെ സാന്ദ്രത ഉചിതമായി കുറയ്ക്കുക

A-5 അനിയലിംഗ് താപനില

—— വളരെ കുറഞ്ഞ അളവിലുള്ള താപനില —— അനുബന്ധ താപനില ഉചിതമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുക

എ -6 സൈക്കിളുകൾ

—— വളരെയധികം സൈക്കിളുകൾ —— സൈക്കിൾ നമ്പർ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക

ചോദ്യം: 50 μl പിസിആർ പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിൽ എത്ര ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ ചേർക്കണം?

ചോദ്യം: നീളമുള്ള ശകലങ്ങൾ എങ്ങനെ വർദ്ധിപ്പിക്കാം?

ഉചിതമായ പോളിമറേസ് തിരഞ്ഞെടുക്കുക എന്നതാണ് ആദ്യപടി. 3'-5 'എക്സോ ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനത്തിന്റെ അഭാവം മൂലം റെഗുലർ ടാക് പോളിമറേസിന് പ്രൂഫ് റീഡ് ചെയ്യാൻ കഴിയില്ല, കൂടാതെ പൊരുത്തക്കേട് ശകലങ്ങളുടെ വിപുലീകരണ കാര്യക്ഷമതയെ ഗണ്യമായി കുറയ്ക്കും. അതിനാൽ, സാധാരണ ടാക് പോളിമറേസിന് 5 കെബിയിൽ കൂടുതലുള്ള ടാർഗെറ്റ് ശകലങ്ങൾ ഫലപ്രദമായി വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയില്ല. വിപുലീകരണ കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനും നീണ്ട ശകലങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനും പ്രത്യേക പരിഷ്ക്കരണങ്ങളോ മറ്റ് ഉയർന്ന വിശ്വാസ്യതയുള്ള പോളിമറേസുകളോ ഉള്ള ടാക് പോളിമറേസ് തിരഞ്ഞെടുക്കണം. കൂടാതെ, നീളമുള്ള ശകലങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് പ്രൈമർ ഡിസൈൻ, ഡീനാറ്ററേഷൻ സമയം, എക്സ്റ്റൻഷൻ സമയം, ബഫർ പിഎച്ച്, മുതലായവ ക്രമീകരിക്കേണ്ടതുണ്ട്. ടെംപ്ലേറ്റ് കേടുപാടുകൾ തടയുന്നതിന്, 94 ° C ലെ ഡീനാറ്ററേഷൻ സമയം ഓരോ ചക്രത്തിലും 30 സെക്കന്റോ അതിൽ കുറവോ ആയി കുറയ്ക്കണം, ആംപ്ലിഫിക്കേഷന് മുമ്പ് താപനില 94 ° C ആയി ഉയർത്താനുള്ള സമയം 1 മിനിറ്റിൽ കുറവായിരിക്കണം. കൂടാതെ, വിപുലീകരണ താപനില ഏകദേശം 68 ° C ആയി ക്രമീകരിക്കുകയും 1 kb/min എന്ന നിരക്കനുസരിച്ച് വിപുലീകരണ സമയം രൂപകൽപ്പന ചെയ്യുകയും ചെയ്താൽ നീണ്ട ശകലങ്ങളുടെ ഫലപ്രദമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉറപ്പാക്കാനാകും.

ചോ: പിസിആറിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ വിശ്വസ്തത എങ്ങനെ മെച്ചപ്പെടുത്താം?

ഉയർന്ന വിശ്വാസ്യതയുള്ള വിവിധ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസുകൾ ഉപയോഗിച്ച് പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ പിശക് നിരക്ക് കുറയ്ക്കാൻ കഴിയും. ഇതുവരെ കണ്ടെത്തിയിട്ടുള്ള എല്ലാ Taq DNA പോളിമറേസുകളിലും Pfu എൻസൈമിന് ഏറ്റവും കുറഞ്ഞ പിശക് നിരക്കും ഏറ്റവും ഉയർന്ന വിശ്വസ്തതയും ഉണ്ട് (അറ്റാച്ചുചെയ്ത പട്ടിക കാണുക). എൻസൈം തിരഞ്ഞെടുപ്പിന് പുറമേ, ബഫർ കോമ്പോസിഷൻ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക, തെർമോസ്റ്റബിൾ പോളിമറേസ് ഏകാഗ്രത, പിസിആർ സൈക്കിൾ നമ്പർ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക എന്നിവയുൾപ്പെടെയുള്ള പ്രതികരണ സാഹചര്യങ്ങൾ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുന്നതിലൂടെ ഗവേഷകർക്ക് പിസിആർ മ്യൂട്ടേഷൻ നിരക്ക് കുറയ്ക്കാനാകും.

നിങ്ങളുടെ സന്ദേശം ഇവിടെ എഴുതി ഞങ്ങൾക്ക് അയയ്ക്കുക

ഉൽപ്പന്ന വിഭാഗങ്ങൾ

എന്തുകൊണ്ടാണ് ഞങ്ങളെ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നത്

സ്ഥാപിതമായതുമുതൽ, ഞങ്ങളുടെ ഫാക്ടറി തത്ത്വം പാലിച്ച് ഒന്നാം ലോകോത്തര ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വികസിപ്പിച്ചുകൊണ്ടിരിക്കുകയാണ്
ആദ്യം ഗുണമേന്മയുള്ള. ഞങ്ങളുടെ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വ്യവസായത്തിൽ മികച്ച പ്രശസ്തിയും പുതിയതും പഴയതുമായ ഉപഭോക്താക്കൾക്കിടയിൽ മൂല്യനിർണ്ണയം നേടിയിട്ടുണ്ട്.

അന്വേഷണം