TIANSeq DirectFast ലൈബ്രറി കിറ്റ് (ഇല്ലുമിന)
സവിശേഷതകൾ
Sequ നല്ല സീക്വൻസിംഗ് യൂണിഫോമിറ്റി: ഡിഎൻഎ ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ പ്രക്രിയയുടെയും പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രക്രിയയുടെയും അടിസ്ഥാന പക്ഷപാതം ഇല്ല.
Library ഉയർന്ന ലൈബ്രറി പരിവർത്തന കാര്യക്ഷമത: 1 എൻജി ഡിഎൻഎ സാമ്പിളുകൾക്ക് ഉയർന്ന കാര്യക്ഷമതയുള്ള ലൈബ്രറി നിർമ്മാണം ഉറപ്പാക്കാനാകും.
Ast വേഗത്തിലുള്ള പ്രവർത്തനം: മുഴുവൻ ലൈബ്രറി നിർമ്മാണ പ്രക്രിയയ്ക്കും 2.5 മണിക്കൂർ മാത്രമേ ആവശ്യമുള്ളൂ.
St ചെലവ് കുറഞ്ഞ: പ്രത്യേക ഉപകരണങ്ങളും ഉപകരണങ്ങളും ആവശ്യമില്ല。
സ്പെസിഫിക്കേഷൻ
തരം: ഇല്ലുമിന ഹൈ-ത്രൂപുട്ട് സീക്വൻസിംഗ് പ്ലാറ്റ്‌ഫോമിനായി ഡിഎൻഎ ലൈബ്രറി തയ്യാറാക്കൽ
സാമ്പിൾ: ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ വലിയ ശകലം ഡിഎൻഎ
ലക്ഷ്യം: ഇരട്ടത്താപ്പ് ഡി.എൻ.എ
സാമ്പിൾ ഇൻപുട്ട് ആരംഭിക്കുന്നു: 1 ng- 1 μg
പ്രവർത്തന സമയം: 2.5 മണിക്കൂർ
ഡൗൺസ്ട്രീം ആപ്ലിക്കേഷനുകൾ: ഇല്യൂമിന പ്ലാറ്റ്ഫോമിൽ സീക്വൻസിംഗ്
എല്ലാ ഉൽപ്പന്നങ്ങളും ODM/OEM- നായി ഇച്ഛാനുസൃതമാക്കാൻ കഴിയും. വിശദാംശങ്ങൾക്ക്,കസ്റ്റമൈസ്ഡ് സർവീസ് (ODM/OEM) ക്ലിക്ക് ചെയ്യുക
വഴങ്ങുന്ന സാമ്പിൾ ഇൻപുട്ടും വിഘടിച്ച വലുപ്പവും |
ചിത്രം 1. വ്യത്യസ്ത പ്രതികരണ സമയത്തിന്റെ ഡിഎൻഎ ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ പ്രൊഫൈലുകൾ. TIANSeq DirectFast DNA ലൈബ്രറി കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് 10 ng, 1000 ng DNA എന്നിവ വിഭജിക്കപ്പെട്ടു. വ്യത്യസ്ത പ്രതികരണ സമയം ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുന്ന പ്രതിപ്രവർത്തന ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ 1.8 × ആമ്പൂർ എക്സ്പി കാന്തിക മുത്തുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കുകയും ആൻജിലന്റ് 2100 വിശകലനം ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. |
കോവാരിസ് പോലുള്ള സീക്വൻസിംഗ് കവറേജ് |
ചിത്രം 2. വ്യത്യസ്ത ലൈബ്രറി തയ്യാറാക്കൽ രീതികളുടെ ജീനോം കവറേജിന്റെ താരതമ്യം. വ്യത്യസ്ത ജിസി ഉള്ളടക്കങ്ങളുള്ള മൂന്ന് ബാക്ടീരിയ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ മിശ്രിത ഇക്വിമോളാർ ആണ്, ഈ രീതികൾ ഉപയോഗിച്ച് 100 എൻജി മിക്സഡ് ഡിഎൻഎ ലൈബ്രറികളുടെ സീക്വൻസിംഗ് ജീനോം കവറേജ് ഫലം താരതമ്യം ചെയ്തു. TIANSeq DirectFast ലൈബ്രറി കിറ്റ് മെക്കാനിക്കൽ ഷിയറിംഗിന്റെ അതേ ഡിഎൻഎ വിഭജനത്തെ ബാധിക്കുന്നുവെന്ന് ഫലങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു, കൂടാതെ വിഘടനത്തിന് അടിസ്ഥാന പക്ഷപാതമില്ല. |
1 ng ഇൻപുട്ട് ഡിഎൻഎ വരെ കുറഞ്ഞ വ്യവസ്ഥാപിത പക്ഷപാതമില്ല |
ചിത്രം 3. വ്യത്യസ്ത ലൈബ്രറി തയ്യാറാക്കൽ രീതികളുടെ ജീനോം കവറേജിന്റെ താരതമ്യം. വ്യത്യസ്ത ജിസി ഉള്ളടക്കങ്ങളുള്ള മൂന്ന് ബാക്ടീരിയ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ മിശ്രിത ഇക്വിമോളാർ ആണ്, ഈ രീതികൾ ഉപയോഗിച്ച് 1 എൻജി മിക്സഡ് ഡിഎൻഎ ലൈബ്രറികളുടെ സീക്വൻസിംഗ് ജീനോം കവറേജ് ഫലം താരതമ്യം ചെയ്തു. TIANSeq DirectFast ലൈബ്രറി കിറ്റിന് 1 ng വരെ ഡി.എൻ.എ. |
| പിസിആർ-ഫ്രീ വർക്ക്ഫ്ലോയുടെ ശേഷി
|
ചിത്രം 4. പിസിആർ അല്ലെങ്കിൽ പിസിആർ രഹിത ലൈബ്രറി നിർമ്മാണത്തിലൂടെ ലൈബ്രറി നിർമ്മിക്കാൻ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎയുടെ വ്യത്യസ്ത ഇൻപുട്ട് ഉപയോഗിച്ചു, ജീനോം കവറേജ് ഫലങ്ങൾ താരതമ്യം ചെയ്തു. വൺ-ട്യൂബ് പ്രവർത്തനവും കാര്യക്ഷമമായ ലൈബ്രറി നിർമ്മാണ ഘട്ടങ്ങളും ഉപയോഗിച്ച്, TIANSeq DirectFast ലൈബ്രറി കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് നിർമ്മിച്ച DNA ലൈബ്രറി PCR സമ്പുഷ്ടീകരണ PCR- രഹിത വർക്ക്ഫ്ലോ രണ്ടിനും ശകലം സീക്വൻസ് കവറേജ് വിതരണത്തിൽ മെക്കാനിക്കൽ ഷിയറിംഗിനൊപ്പം ഉയർന്ന സ്ഥിരത നിലനിർത്തുന്നുവെന്ന് ഫലങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു. |
ലൈബ്രറി നിർമ്മാണ കാര്യക്ഷമതയുടെയും വിളവിന്റെയും സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകൾ |
ചിത്രം 5. വ്യത്യസ്ത പ്രാരംഭ തുകകളുള്ള (1, 10, 25, 50, 100, 500,1000 ng) സാമ്പിളുകൾക്കുള്ള PCR- രഹിത രീതി വഴി ലൈബ്രറി നിർമ്മാണത്തിന് ശേഷം qPCR ലഭിച്ച ലൈബ്രറി DNA യുടെ അളവ് വിശകലനത്തിന്റെ ഫലങ്ങൾ. ലൈനിയർ റിഗ്രഷൻ വിശകലനം കാണിക്കുന്നത് ലൈബ്രറി വിളവിന് വിശാലമായ സാമ്പിൾ ഇൻപുട്ട് ശ്രേണിയിൽ നല്ല രേഖീയ ബന്ധമുണ്ടെന്നാണ്. ഡിഎൻഎ ഇൻപുട്ടിന് 1 എൻജി വരെ, ലൈബ്രറി നിർമ്മാണത്തിന്റെ കാര്യക്ഷമത കുറയുന്നില്ല. |
വ്യത്യസ്ത ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ ഡാറ്റ ക്രമം താരതമ്യം ചെയ്യുക
നിലവിൽ, ഹൈ-ത്രൂപുട്ട് സീക്വൻസിംഗ് സാങ്കേതികവിദ്യ പ്രധാനമായും അടുത്ത തലമുറ സീക്വൻസിംഗ് സാങ്കേതികവിദ്യയെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്. അടുത്ത തലമുറ സീക്വൻസിംഗ് സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ വായനാ ദൈർഘ്യം പരിമിതമായതിനാൽ, നമ്മൾ മുഴുവൻ ദൈർഘ്യമുള്ള ശ്രേണികളെ ചെറിയ ശകല ലൈബ്രറികളായി വിഭജിക്കണം. വ്യത്യസ്ത സീക്വൻസിംഗ് പരീക്ഷണങ്ങളുടെ ആവശ്യങ്ങൾക്കനുസരിച്ച്, ഞങ്ങൾ സാധാരണയായി സിംഗിൾ-എൻഡ് സീക്വൻസിംഗ് അല്ലെങ്കിൽ ഡബിൾ-എൻഡ് സീക്വൻസിംഗ് തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നു. നിലവിൽ അടുത്ത തലമുറ സീക്വൻസിംഗ് ലൈബ്രറിയുടെ ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങൾ സാധാരണയായി 200-800 ബിപി പരിധിയിലാണ് വിതരണം ചെയ്യുന്നത്.
എ) ഡിഎൻഎ ഗുണനിലവാരമില്ലാത്തതും ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. എൻസൈം പ്രവർത്തനം തടയുന്നതിന് ഉയർന്ന നിലവാരമുള്ള ഡിഎൻഎ സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിക്കുക.
ബി) ഡിഎൻഎ ലൈബ്രറി നിർമ്മിക്കാൻ പിസിആർ രഹിത രീതി ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ ഡിഎൻഎ സാമ്പിളിന്റെ അളവ് അപര്യാപ്തമാണ്. വിഘടിച്ച ഡിഎൻഎയുടെ ഇൻപുട്ട് 50 എൻജി കവിയുമ്പോൾ, ലൈബ്രറി നിർമ്മാണ പ്രക്രിയയിൽ പിസിആർ രഹിത വർക്ക്ഫ്ലോ തിരഞ്ഞെടുക്കാവുന്നതാണ്. ലൈബ്രറിയുടെ പകർപ്പ് നമ്പർ നേരിട്ട് ക്രമീകരിക്കാൻ കഴിയാത്തവിധം കുറവാണെങ്കിൽ, അഡാപ്റ്റർ ലിഗേഷനുശേഷം ഡിഎൻഎ ലൈബ്രറി പിസിആർ വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും.
സി) ആർ‌എൻ‌എ മലിനീകരണം കൃത്യമല്ലാത്ത പ്രാരംഭ ഡിഎൻഎ ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷനിലേക്ക് നയിക്കുന്നു, ആർ‌എൻ‌എ മലിനീകരണം ജനിതക ഡിഎൻഎയുടെ ശുദ്ധീകരണ പ്രക്രിയയിൽ നിലനിൽക്കാം, ഇത് ലൈബ്രറി നിർമ്മാണ സമയത്ത് കൃത്യമല്ലാത്ത ഡിഎൻഎ ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷനും അപര്യാപ്തമായ ഡിഎൻഎ ലോഡിംഗിനും ഇടയാക്കും. ആർ‌എൻ‌എസുമായി ചികിത്സിക്കുന്നതിലൂടെ ആർ‌എൻ‌എ നീക്കംചെയ്യാനാകും.
എ -1
a) ചെറിയ ശകലങ്ങൾ (60 bp-120 bp) പ്രത്യക്ഷപ്പെടുന്നു ചെറിയ ശകലങ്ങൾ സാധാരണയായി അഡാപ്റ്റർ ശകലങ്ങൾ അല്ലെങ്കിൽ അഡാപ്റ്ററുകൾ രൂപംകൊണ്ട ഡൈമറുകൾ ആണ്. Agencourt AMPure XP മാഗ്നറ്റിക് മുത്തുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കുന്നതിലൂടെ ഈ അഡാപ്റ്റർ ശകലങ്ങൾ ഫലപ്രദമായി നീക്കം ചെയ്യാനും സീക്വൻസിംഗ് ഗുണനിലവാരം ഉറപ്പാക്കാനും കഴിയും.
ബി) പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനുശേഷം ലൈബ്രറിയിൽ വലിയ ശകലങ്ങൾ പ്രത്യക്ഷപ്പെടുന്നു, അഡാപ്റ്റർ ലിഗേറ്റ് ചെയ്ത ശേഷം ലൈബ്രറി ഡിഎൻഎ ശകലത്തിന്റെ വലുപ്പം 120 ബിപി വർദ്ധിക്കും. അഡാപ്റ്റർ ലിഗേഷനുശേഷം ഡിഎൻഎ ശകലം 120 ബിപിയിൽ കൂടുതലാണെങ്കിൽ, അമിതമായ പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ അസാധാരണമായ ശകലങ്ങളുടെ വർദ്ധനവ് കാരണമാകാം. പിസിആർ സൈക്കിളുകളുടെ എണ്ണം കുറയ്ക്കുന്നത് സാഹചര്യം തടയാൻ കഴിയും.
സി) അഡാപ്റ്റർ ലിഗേഷനുശേഷം ലൈബ്രറി ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങളുടെ അസാധാരണ വലുപ്പം ഈ കിറ്റിലെ അഡാപ്റ്ററിന്റെ നീളം 60 ബിപി ആണ്. ശകലത്തിന്റെ രണ്ട് അറ്റങ്ങളും അഡാപ്റ്ററുകളുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുമ്പോൾ, ദൈർഘ്യം 120 bp വർദ്ധിക്കും. ഈ കിറ്റ് നൽകിയതല്ലാതെ ഒരു അഡാപ്റ്റർ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, അഡാപ്റ്റർ ദൈർഘ്യം പോലുള്ള പ്രസക്തമായ വിവരങ്ങൾ നൽകാൻ വിതരണക്കാരനെ ബന്ധപ്പെടുക. പരീക്ഷണ വർക്ക്ഫ്ലോയും പ്രവർത്തനവും മാനുവലിൽ വിവരിച്ചിരിക്കുന്ന ഘട്ടങ്ങൾ പാലിക്കുന്നുണ്ടെന്ന് ഉറപ്പുവരുത്തുക.
ഡി) അഡാപ്റ്റർ ലിഗേഷന് മുമ്പുള്ള അസാധാരണ ഡിഎൻഎ ശകലം വലിപ്പം ഈ പ്രശ്നത്തിന്റെ കാരണം ഡിഎൻഎ ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ സമയത്ത് തെറ്റായ പ്രതികരണ സാഹചര്യങ്ങൾ കാരണമാകാം. വ്യത്യസ്ത ഡിഎൻഎ ഇൻപുട്ടിനായി വ്യത്യസ്ത പ്രതികരണ സമയങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കണം. ഡിഎൻഎ ഇൻപുട്ട് 10 എൻ‌ജിയിൽ കൂടുതലാണെങ്കിൽ, ഒപ്റ്റിമൈസേഷന്റെ ആരംഭ സമയമായി 12 മിനിറ്റിന്റെ പ്രതികരണ സമയം തിരഞ്ഞെടുക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു, ഈ സമയത്ത് നിർമ്മിക്കുന്ന ശകലത്തിന്റെ വലുപ്പം പ്രധാനമായും 300-500 ബിപി പരിധിയിലാണ്. ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങൾ ആവശ്യമായ വലുപ്പത്തിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുന്നതിന് ഉപയോക്താക്കൾക്ക് അവരുടെ സ്വന്തം ആവശ്യങ്ങൾക്കനുസരിച്ച് 2-4 മിനിറ്റ് വരെ ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങളുടെ നീളം കൂട്ടാനോ കുറയ്ക്കാനോ കഴിയും.
എ -2
എ) വിഘടിക്കുന്ന സമയം ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്തിട്ടില്ലെങ്കിൽ, വിഘടിച്ച ഡിഎൻഎ വളരെ ചെറുതോ വലുതോ ആണെങ്കിൽ, പ്രതികരണ സമയം നിർണ്ണയിക്കാൻ നിർദ്ദേശത്തിൽ നൽകിയിരിക്കുന്ന വിഘടനാ സമയ തിരഞ്ഞെടുപ്പിനുള്ള മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾ കാണുക, കൂടാതെ ഈ സമയ പോയിന്റ് ഒരു നിയന്ത്രണമായി ഉപയോഗിക്കുക, കൂടാതെ ഒരു സജ്ജമാക്കുക വിഘടനാസമയത്ത് കൂടുതൽ കൃത്യമായ ക്രമീകരണം വരുത്തുന്നതിന് 3 മിനിറ്റ് നീട്ടാനോ കുറയ്ക്കാനോ ഉള്ള പ്രതികരണ സംവിധാനം.
എ -3
വിഘടിത ചികിത്സയ്ക്ക് ശേഷം ഡിഎൻഎയുടെ അസാധാരണ വലുപ്പ വിതരണം
എ) ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ റിയാജന്റിന്റെ തെറ്റായ ഉരുകൽ രീതി, അല്ലെങ്കിൽ ഉരുകിയതിനുശേഷം റിയാജന്റ് പൂർണ്ണമായും മിശ്രിതമല്ല. 5 × ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ എൻസൈം മിക്സ് റിയാജന്റ് ഐസിൽ ഉരുകുക. ഉരുകിയുകഴിഞ്ഞാൽ, ട്യൂബിന്റെ അടിഭാഗം സentlyമ്യമായി അമർത്തിക്കൊണ്ട് റിയാജന്റ് തുല്യമായി ഇളക്കുക. റിയാക്ടറിനെ ചുഴറ്റരുത്!
ബി) ഡിഎൻഎ ഇൻപുട്ട് സാമ്പിളിൽ EDTA അല്ലെങ്കിൽ മറ്റ് മലിനീകരണം അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു ഉപ്പ് അയോണുകളുടെ കുറവ്, DNA ശുദ്ധീകരണ ഘട്ടത്തിലെ ചെലേറ്റിംഗ് ഏജന്റുകൾ പരീക്ഷണത്തിന്റെ വിജയത്തിന് പ്രത്യേകിച്ചും പ്രധാനമാണ്. ഡിഎൻഎ 1 × ടിഇയിൽ അലിഞ്ഞുചേർന്നാൽ, വിഘടനം നടത്താൻ നിർദ്ദേശത്തിൽ നൽകിയിരിക്കുന്ന രീതി ഉപയോഗിക്കുക. ലായനിയിലെ EDTA സാന്ദ്രത അനിശ്ചിതമാണെങ്കിൽ, ഡിഎൻഎ ശുദ്ധീകരിക്കാനും തുടർന്നുള്ള പ്രതികരണത്തിനായി ഡയോണൈസ്ഡ് വെള്ളത്തിൽ ലയിപ്പിക്കാനും ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
സി) കൃത്യമല്ലാത്ത പ്രാരംഭ ഡിഎൻഎ അളവ് വിഘടിത ചികിത്സയ്ക്ക് മുമ്പ്, പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിലെ ഡിഎൻഎയുടെ കൃത്യമായ അളവ് നിർണ്ണയിക്കാൻ ക്യുബിറ്റ്, പികോഗ്രീൻ, മറ്റ് രീതികൾ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് ഡിഎൻഎയുടെ കൃത്യമായ അളവ് നിർണ്ണയിക്കേണ്ടത് അത്യാവശ്യമാണ്.
d) പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിന്റെ തയ്യാറെടുപ്പ് നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുന്നില്ല, ശിഥിലമായ പ്രതിപ്രവർത്തന സംവിധാനം തയ്യാറാക്കുന്നത് നിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസൃതമായി ഹിമത്തിൽ നടത്തണം. മികച്ച പ്രഭാവം ഉറപ്പാക്കാൻ, എല്ലാ പ്രതികരണ ഘടകങ്ങളും ഹിമത്തിൽ സ്ഥാപിക്കുകയും പൂർണ്ണ തണുപ്പിക്കൽ കഴിഞ്ഞ് പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കുകയും വേണം. തയ്യാറെടുപ്പ് പൂർത്തിയായ ശേഷം, നന്നായി ഇളക്കുകയോ ഫ്ലിക്ക് ചെയ്യുകയോ ചെയ്യുക. ചുഴലിക്കാറ്റ് ചെയ്യരുത്!
1. അനുചിതമായ മിശ്രിത രീതി (ചുഴലിക്കാറ്റ്, അക്രമാസക്തമായ ആന്ദോളനം മുതലായവ) ലൈബ്രറി ശകലങ്ങളുടെ അസാധാരണ വിതരണത്തിന് കാരണമാകും (ഇനിപ്പറയുന്ന ചിത്രത്തിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ), അങ്ങനെ ലൈബ്രറിയുടെ ഗുണനിലവാരത്തെ ബാധിക്കുന്നു. അതിനാൽ, ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ മിക്സ് റിയാക്ഷൻ സൊല്യൂഷൻ തയ്യാറാക്കുമ്പോൾ, സ mixമ്യമായി മുകളിലേക്കും താഴേക്കും കുഴയ്ക്കുക, അല്ലെങ്കിൽ വിരൽത്തുമ്പിൽ ഫ്ലിക്ക് ചെയ്ത് തുല്യമായി ഇളക്കുക. ചുഴിയിൽ കലരാതിരിക്കാൻ ശ്രദ്ധിക്കുക.
2. ലൈബ്രറി നിർമ്മാണത്തിന് ഉയർന്ന പരിശുദ്ധി ഡിഎൻഎ ഉപയോഗിക്കണം
DNA നല്ല ഡിഎൻഎ സമഗ്രത: ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ബാൻഡ് 30 കെബിയിൽ കൂടുതലാണ്, വാലില്ലാതെ
OD260/230:> 1.5
■ OD260/280: 1.7-1.9
3. ഡിഎൻഎ ഇൻപുട്ട് തുക കൃത്യമായിരിക്കണം, നാനോഡ്രോപ്പിനേക്കാൾ ഡിഎൻഎ അളക്കാൻ ക്യുബിറ്റ്, പിക്കോഗ്രീൻ രീതികൾ ഉപയോഗിക്കാൻ നിർദ്ദേശിക്കുന്നു.
4. ഡിഎൻഎ ലായനിയിലെ ഇഡിടിഎയുടെ ഉള്ളടക്കം നിർണയിക്കണം, ഇഡിടിഎയ്ക്ക് വിഘടനാ പ്രതികരണത്തിൽ വലിയ സ്വാധീനമുണ്ട്. EDTA- യുടെ ഉള്ളടക്കം ഉയർന്നതാണെങ്കിൽ, തുടർന്നുള്ള പരിശോധനയ്ക്ക് മുമ്പ് DNA ശുദ്ധീകരണം നടത്തേണ്ടതുണ്ട്.
5. ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ റിയാക്ഷൻ സൊല്യൂഷൻ ഐസിൽ തയ്യാറാക്കണം പ്രതികരണ സമയത്തിന്റെ കൃത്യത ഉറപ്പുവരുത്തുന്നതിനായി, ദയവായി ഐസിൽ പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കുക.
6. ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ പ്രതികരണ സമയം കൃത്യമായിരിക്കണം.
1. ഈ കിറ്റിന് ഏതുതരം സാമ്പിൾ ബാധകമാണ്?
ഈ കിറ്റിന്റെ ബാധകമായ സാമ്പിൾ തരം മൊത്തം ആർ‌എൻ‌എ അല്ലെങ്കിൽ നല്ല ആർ‌എൻ‌എ സമഗ്രതയുള്ള ശുദ്ധീകരിച്ച mRNA ആകാം. ലൈബ്രറി നിർമ്മിക്കാൻ മൊത്തം ആർ‌എൻ‌എ ഉപയോഗിക്കുന്നുവെങ്കിൽ, ആദ്യം ആർ‌ആർ‌എൻ‌എ നീക്കംചെയ്യുന്നതിന് ആർ‌ആർ‌എൻ‌എ ഡിപ്ലീഷൻ കിറ്റ് (ക്യാറ്റ്#4992363/4992364/4992391) ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
2. ഈ കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് ലൈബ്രറി നിർമ്മിക്കാൻ FFPE സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിക്കാമോ?
FFPE സാമ്പിളുകളിലെ mRNA ഒരു പരിധിവരെ തരംതാഴ്ത്തപ്പെടും, താരതമ്യേന മോശം സത്യസന്ധതയോടെ. ലൈബ്രറി നിർമ്മാണത്തിനായി ഈ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ സമയം ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു (ഫ്രാഗ്മെൻറേഷൻ സമയം കുറയ്ക്കുകയോ അല്ലെങ്കിൽ വിഘടനം നടത്താതിരിക്കുകയോ ചെയ്യുക).
3. ഉൽപ്പന്ന മാനുവലിൽ നൽകിയിരിക്കുന്ന വലുപ്പം തിരഞ്ഞെടുക്കൽ ഘട്ടം ഉപയോഗിച്ച്, ഉൾപ്പെടുത്തിയ സെഗ്‌മെന്റിൽ ചെറിയ വ്യതിയാനം പ്രത്യക്ഷപ്പെടാൻ ഇടയാക്കിയതെന്താണ്?
ഈ ഉൽപ്പന്ന മാനുവലിലെ വലുപ്പം തിരഞ്ഞെടുക്കുന്ന ഘട്ടത്തിന് അനുസൃതമായി വലുപ്പ തിരഞ്ഞെടുക്കൽ നടത്തണം. വ്യതിയാനം ഉണ്ടെങ്കിൽ, കാരണം കാന്തിക മുത്തുകൾ temperatureഷ്മാവിൽ സന്തുലിതമല്ല അല്ലെങ്കിൽ പൂർണ്ണമായി മിശ്രിതമല്ല, പൈപ്പറ്റ് കൃത്യമല്ല അല്ലെങ്കിൽ ദ്രാവകം നുറുങ്ങിൽ തുടരും. പരീക്ഷണത്തിനായി കുറഞ്ഞ ആഡ്സോർപ്ഷൻ ഉള്ള നുറുങ്ങുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
4. ലൈബ്രറി നിർമ്മാണത്തിൽ അഡാപ്റ്ററുകളുടെ തിരഞ്ഞെടുപ്പ്
ലൈബ്രറി നിർമ്മാണ കിറ്റിൽ അഡാപ്റ്റർ റിയാജന്റ് അടങ്ങിയിട്ടില്ല, കൂടാതെ ഈ കിറ്റ് TIANSeq സിംഗിൾ-ഇൻഡക്സ് അഡാപ്റ്റർ (Illumina) (4992641/4992642/4992378) ഉപയോഗിച്ച് ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
5. ലൈബ്രറിയുടെ ക്യുസി
ലൈബ്രറി ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് ഡിറ്റക്ഷൻ: ലൈബ്രറിയുടെ പിണ്ഡ സാന്ദ്രതയും മോളാർ സാന്ദ്രതയും നിർണ്ണയിക്കാൻ ക്യുബിറ്റും ക്യുപിസിആറും ഉപയോഗിക്കുന്നു. ഉൽപ്പന്ന മാനുവലിന് അനുസൃതമായാണ് പ്രവർത്തനം. ലൈബ്രറിയുടെ സാന്ദ്രത സാധാരണയായി NGS സീക്വൻസിംഗിന്റെ ആവശ്യകതകൾ നിറവേറ്റും. ലൈബ്രറി വിതരണ ശ്രേണി കണ്ടെത്തൽ: ലൈബ്രറി വിതരണ ശ്രേണി കണ്ടെത്താൻ അജിലന്റ് 2100 ബയോഅനലൈസർ ഉപയോഗിക്കുന്നു.
6. ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സൈക്കിൾ നമ്പർ തിരഞ്ഞെടുക്കൽ
നിർദ്ദേശങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, PCR സൈക്കിളുകളുടെ എണ്ണം 6-12 ആണ്, സാമ്പിൾ ഇൻപുട്ട് അനുസരിച്ച് ആവശ്യമായ PCR സൈക്കിളുകളുടെ എണ്ണം തിരഞ്ഞെടുക്കണം. ഉയർന്ന വിളവ് ലഭിക്കുന്ന ലൈബ്രറികളിൽ, സാധാരണഗതിയിൽ വ്യത്യസ്ത അളവിലാണ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സംഭവിക്കുന്നത്, ഇത് അജിലന്റ് 2100 ബയോഅനലൈസർ കണ്ടെത്തുന്നതിലെ ടാർഗെറ്റ് ശ്രേണിയുടെ ഉന്നതിക്ക് ശേഷം അൽപ്പം വലിയ കൊടുമുടിയിലൂടെ പ്രകടമാകുന്നു, അല്ലെങ്കിൽ ക്യുബിറ്റിന്റെ സാന്ദ്രത ക്യുപിസിആറിനേക്കാൾ കുറവാണ്. മൈൽഡ് ഓവർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഒരു സാധാരണ പ്രതിഭാസമാണ്, ഇത് ലൈബ്രറി സീക്വൻസിംഗിനെയും തുടർന്നുള്ള ഡാറ്റ വിശകലനത്തെയും ബാധിക്കില്ല.
7. അജിലന്റ് 2100 ബയോഅനലൈസറിന്റെ കണ്ടെത്തൽ പ്രൊഫൈലിൽ സ്പൈക്കുകൾ പ്രത്യക്ഷപ്പെടുന്നു
അജിലന്റ് 2100 ബയോഅനലൈസർ കണ്ടെത്തലിൽ സ്പൈക്കുകൾ പ്രത്യക്ഷപ്പെടുന്നത് സാമ്പിളുകളുടെ അസമമായ വിഘടനം മൂലമാണ്, അവിടെ നിശ്ചിത വലുപ്പത്തിൽ കൂടുതൽ ശകലങ്ങൾ ഉണ്ടാകും, ഇത് പിസിആർ സമ്പുഷ്ടീകരണത്തിന് ശേഷം കൂടുതൽ വ്യക്തമാകും. ഈ സാഹചര്യത്തിൽ, വലിപ്പം തിരഞ്ഞെടുക്കരുതെന്ന് നിർദ്ദേശിക്കപ്പെടുന്നു, അതായത് ശകലത്തിന്റെ അവസ്ഥ 94 ° C ആയി 15 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റഡ് ആയി സജ്ജമാക്കുക, അവിടെ ശകലത്തിന്റെ വിതരണം ചെറുതും കേന്ദ്രീകൃതവുമാണ്, കൂടാതെ ഏകത മെച്ചപ്പെടുത്താനും കഴിയും.
ഉൽപ്പന്ന വിഭാഗങ്ങൾ
എന്തുകൊണ്ടാണ് ഞങ്ങളെ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നത്
സ്ഥാപിതമായതുമുതൽ, ഞങ്ങളുടെ ഫാക്ടറി തത്ത്വം പാലിച്ച് ഒന്നാം ലോകോത്തര ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വികസിപ്പിച്ചുകൊണ്ടിരിക്കുകയാണ്
ആദ്യം ഗുണമേന്മയുള്ള. ഞങ്ങളുടെ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വ്യവസായത്തിൽ മികച്ച പ്രശസ്തിയും പുതിയതും പഴയതുമായ ഉപഭോക്താക്കൾക്കിടയിൽ മൂല്യനിർണ്ണയം നേടിയിട്ടുണ്ട്.
- ഫോൺ: +86 010-59822688
- കെട്ടിടം 5, നമ്പർ 86, ഷുവാങ്‌യിംഗ് വെസ്റ്റ് റോഡ്, ചാങ്പിംഗ് ജില്ല, ബീജിംഗ്.
- people@tiangen.com
