ബ്ലഡ് ഡയറക്ട് പിസിആർ കിറ്റ്

വേർതിരിച്ചെടുക്കാതെ തന്നെ രക്തത്തെ ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായി നേരിട്ട് ഉപയോഗിച്ച് ടാർഗെറ്റ് ജീനിന്റെ ദ്രുതഗതിയിലുള്ള വർദ്ധനവ്.

ഈ കിറ്റ് മനുഷ്യ ജീനോമിലെ സിംഗിൾ കോപ്പി ജീനുകളെ കാര്യക്ഷമമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് ജനിതകപരമായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത ആന്റി-ഇൻഹിബിറ്റർ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് സ്വീകരിക്കുന്നു. ഈ കിറ്റിലെ മികച്ച ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത ബഫർ സിസ്റ്റം പോളിമറേസിനെ പിസിആർ ഇൻഹിബിറ്ററുകളുടെ പ്രതിരോധത്തെ ശക്തമായി പ്രതിരോധിക്കാൻ സഹായിക്കുന്നു, അങ്ങനെ രക്തവും സംസ്ക്കരിച്ച കോശങ്ങളും ടെംപ്ലേറ്റുകളായി ഉപയോഗിച്ച് ഡിഎൻഎയെ നേരിട്ട് വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും. ഈ ഉൽ‌പ്പന്നം പ്രവർത്തിക്കാൻ എളുപ്പമാണ് കൂടാതെ ഡി‌എൻ‌എ ശുദ്ധീകരണം അല്ലെങ്കിൽ സാമ്പിൾ പ്രീട്രീറ്റ്മെന്റ് പോലുള്ള സങ്കീർണ്ണമായ ഘട്ടങ്ങൾ ആവശ്യമില്ല.
ഈ കിറ്റ് 2 × മാസ്റ്റർമിക്സ് ആയി നൽകിയിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ രക്ത ടെംപ്ലേറ്റും അനുബന്ധ ഡിറ്റക്ഷൻ പ്രൈമറുകളും ചേർത്ത് പ്രതികരണം നടത്താൻ കഴിയും. സസ്തനികളായ മനുഷ്യർ, എലികൾ, പന്നികൾ, കന്നുകാലികൾ, മറ്റ് ഇനങ്ങൾ, പുതിയ അല്ലെങ്കിൽ 4 ℃ ക്രയോപ്രെസർവ്ഡ് മുഴുവൻ രക്തം, ആൻറിഓകോഗുലന്റ് (ഇഡിടിഎ, സിട്രേറ്റ്, ഹെപ്പാരിൻ), ദ്രവീകൃത രക്തം കട്ടപിടിക്കൽ, വരണ്ട രക്തക്കറകൾ എന്നിവയിൽ ഇത് പ്രയോഗിക്കാം. Whatman 903, FTA Elute വാണിജ്യ കാർഡുകളിൽ സംഭരിച്ചിരിക്കുന്നു.

പൂച്ച ഇല്ല	പാക്കിംഗ് വലുപ്പം
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

ഞങ്ങൾക്ക് ഇമെയിൽ അയയ്ക്കുക

ഉൽപ്പന്ന വിശദാംശം

പരീക്ഷണാത്മക ഉദാഹരണം

പതിവുചോദ്യങ്ങൾ

ഉൽപ്പന്ന ടാഗുകൾ

സവിശേഷതകൾ

And ലളിതവും വേഗമേറിയതും: സാമ്പിൾ തയ്യാറാക്കുന്നതിന്റെയും ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിന്റെയും മടുപ്പിക്കുന്ന ഘട്ടങ്ങളില്ലാതെ, രക്തം ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിച്ച് PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ നേരിട്ട് നടത്താവുന്നതാണ്.
Pur ഉയർന്ന പരിശുദ്ധി: സാമ്പിൾ പ്രീ-ട്രീറ്റ്മെന്റ്, ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ ഘട്ടങ്ങൾ ഒഴിവാക്കുന്നത് സാമ്പിളുകളുടെ ക്രോസ്-മലിനീകരണം ഒഴിവാക്കാൻ സഹായിക്കും.
Through ഉയർന്ന ത്രൂപുട്ട്: വലിയ അളവിലുള്ള സാമ്പിളുകൾക്കുള്ള പിസിആർ ഐഡന്റിഫിക്കേഷൻ കിറ്റ് 96/384-കിണർ പിസിആർ പ്ലേറ്റുകളുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് നടത്താവുന്നതാണ്.
Univers ശക്തമായ സാർവത്രികത: സങ്കീർണ്ണമായ ദ്വിതീയ ഘടനയുള്ള ഉയർന്ന ജിസി ശകലങ്ങളോ ശകലങ്ങളോ കാര്യക്ഷമമായി വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ ഈ കിറ്റിന് കഴിയും, കൂടാതെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ദൈർഘ്യം 5 കെബി വരെയാകാം.
Stress ശക്തമായ സമ്മർദ്ദ പ്രതിരോധം: ഈ കിറ്റ് വിവിധ ജീവിവർഗ്ഗങ്ങൾക്കും വ്യത്യസ്ത രീതികളിൽ സംരക്ഷിച്ചിരിക്കുന്ന രക്ത സാമ്പിളുകൾക്കും പ്രയോഗിക്കാവുന്നതാണ്.

അപേക്ഷകൾ

ഈ കിറ്റിന്റെ PCR ഉൽപന്നങ്ങളിൽ 3A-end- ൽ "A" അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, ഇത് TA വെക്റ്റർ ക്ലോണിംഗിന് നേരിട്ട് ഉപയോഗിക്കാം. ഈ കിറ്റ് ജനിതക ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങൾ, ഹൈ-ത്രൂപുട്ട് ജനിതക വിശകലനം, ജീനോടൈപ്പിംഗ് (ജീൻ ഡിറ്റക്ഷൻ പോലുള്ളവ) എന്നിവയുടെ വിശകലനത്തിനായി ഉപയോഗിക്കാം.

എല്ലാ ഉൽപ്പന്നങ്ങളും ODM/OEM- നായി ഇച്ഛാനുസൃതമാക്കാൻ കഴിയും. വിശദാംശങ്ങൾക്ക്,കസ്റ്റമൈസ്ഡ് സർവീസ് (ODM/OEM) ക്ലിക്ക് ചെയ്യുക

മുമ്പത്തെ: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR കിറ്റ്

അടുത്തത്: മൗസ് ടിഷ്യു ഡയറക്ട് പിസിആർ കിറ്റ്

	മനുഷ്യ EDTA ആൻറിഓകോഗുലേഷൻ ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിച്ച്, വ്യത്യസ്ത GC ഉള്ളടക്കങ്ങളുള്ള 4 ജീനുകൾ ബ്ലഡ് ഡയറക്ട് PCR കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് വർദ്ധിപ്പിച്ചു. പിസിആർ പ്രതികരണ സംവിധാനം 20 μl ആയിരുന്നു, 1 μl രക്തം ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിച്ചു. എം: ടിയാൻജൻ മാർക്കർ II; 1: ശകലത്തിന്റെ വലുപ്പം 1090 bp, GC ഉള്ളടക്കം 68.1%; 2: ശകലത്തിന്റെ വലുപ്പം 1915 bp, GC ഉള്ളടക്കം 70.4%; 3: ശകലം വലിപ്പം 448 bp, GC ഉള്ളടക്കം 74.8%; 4: ശകലത്തിന്റെ വലുപ്പം 1527 bp, GC ഉള്ളടക്കം 61.5%. പരീക്ഷണാത്മക ഫലങ്ങൾ: ബ്ലഡ് ഡയറക്ട് പിസിആർ കിറ്റിന് ഡിസിഎ ശകലങ്ങൾ 61.5%-74.8%പരിധിയിൽ ഫലപ്രദമായി വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും, ഇത് ഉയർന്ന ജിസി ശകലങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിവുള്ളതാണെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
	ഹ്യൂമൻ EDTA ആൻറിഓകോഗുലേഷൻ ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിക്കുന്നത്, വ്യത്യസ്ത ദൈർഘ്യമുള്ള 5 ജീനുകൾ (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0, Hn4.0) ബ്ലഡ് ഡയറക്ട് PCR കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് വർദ്ധിപ്പിച്ചു. പിസിആർ പ്രതികരണ സംവിധാനം 20 μl ആയിരുന്നു, 1 μl രക്തം ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിച്ചു. എം: ടിയാൻജൻ മാർക്കർ II; 1-3: 3 വ്യത്യസ്ത രക്ത സാമ്പിളുകൾ; NTC: പ്രൈമറുകൾ ഇല്ലാതെ നിയന്ത്രണം. പരീക്ഷണാത്മക ഫലങ്ങൾ: ബ്ലഡ് ഡയറക്റ്റ് പിസിആർ കിറ്റിന് 4 കെബി വരെ നീളമുള്ള ശകലങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും, ഇത് നീളമുള്ള ശകലങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
	ടെംപ്ലേറ്റായി മനുഷ്യന്റെ EDTA ആൻറിഓകോഗുലേഷൻ ഉപയോഗിച്ച്, വ്യത്യസ്ത രക്ത സാമ്പിളുകൾ PCR കണ്ടെത്തുന്നതിന് ബ്ലഡ് ഡയറക്ട് PCR കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ചു. പിസിആർ പ്രതികരണ സംവിധാനം 20 μl ആയിരുന്നു, 1 μl രക്തം ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിച്ചു. എം: ടിയാൻജൻ മാർക്കർ II; 1-9: രക്തത്തിന്റെ ലോഡിംഗ് അളവ് യഥാക്രമം 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl, 5 μl എന്നിവയാണ്; NTC: ടെംപ്ലേറ്റ് ഇല്ലാതെ നിയന്ത്രണം പരീക്ഷണാത്മക ഫലങ്ങൾ: ബ്ലഡ് ഡയറക്റ്റ് പിസിആർ കിറ്റിന് രക്തത്തോട് ശക്തമായ പ്രതിരോധമുണ്ട്, കൂടാതെ 0.1-5 μl ലോഡിംഗ് ശ്രേണിയിൽ രക്ത സാമ്പിളുകൾ വർദ്ധിപ്പിക്കാനും കഴിയും.
	വ്യത്യസ്ത ചികിത്സകളുള്ള മനുഷ്യൻ, എലി, കോഴി, മറ്റ് ജീവികൾ എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള രക്ത സാമ്പിളുകൾ ടെംപ്ലേറ്റുകളായി ഉപയോഗിച്ചു. PRNP (മനുഷ്യൻ, 750 bp), ആക്റ്റിൻ (എലി, 200 bp), β-Actin (ചിക്കൻ, 1.0 kb) എന്നിവ വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ ബ്ലഡ് ഡയറക്ട് PCR കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ചു. പിസിആർ പ്രതികരണ സംവിധാനം 20 μl ആയിരുന്നു, 1 μl രക്തം ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിച്ചു. എം: ടിയാൻജൻ മാർക്കർ II. പരീക്ഷണാത്മക ഫലങ്ങൾ: വൈവിധ്യമാർന്ന സാമ്പിളുകളിൽ ബ്ലഡ് ഡയറക്ട് പിസിആർ കിറ്റ് പ്രയോഗിക്കാവുന്നതാണ്, കൂടാതെ വിവിധ ചികിത്സാരീതികളുള്ള വിവിധ ഇനങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള രക്ത സാമ്പിളുകളിൽ നേരിട്ട് പിസിആർ കണ്ടെത്തൽ നടത്താം.

ചോദ്യം: ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബാൻഡുകളൊന്നുമില്ല

A-1 ടെംപ്ലേറ്റ്

ടെംപ്ലേറ്റിൽ പ്രോട്ടീൻ മാലിന്യങ്ങൾ അല്ലെങ്കിൽ ടാക് ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ മുതലായവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു - ഡിഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ് ശുദ്ധീകരിക്കുക, പ്രോട്ടീൻ മാലിന്യങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്യുക അല്ലെങ്കിൽ ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്റ്റ് ചെയ്യുക.

Temp ടെംപ്ലേറ്റ് ഡീനാറ്ററേഷൻ പൂർത്തിയായിട്ടില്ല —— ഉചിതമായി ഡിനാറ്ററേഷൻ താപനില വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ഡീനാറ്ററേഷൻ സമയം ദീർഘിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

Mp ടെംപ്ലേറ്റ് ഡീഗ്രഡേഷൻ —— ടെംപ്ലേറ്റ് വീണ്ടും തയ്യാറാക്കുക.

എ -2 പ്രൈമർ

Pri പ്രൈമറുകളുടെ മോശം നിലവാരം —— പ്രൈമർ വീണ്ടും സമന്വയിപ്പിക്കുക.

Mer പ്രൈമർ ഡീഗ്രഡേഷൻ —— സംരക്ഷണത്തിനായി ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയുള്ള പ്രൈമറുകൾ ചെറിയ അളവിലേക്ക് മാറ്റുക. ഒന്നിലധികം മരവിപ്പിക്കൽ, ഉരുകൽ അല്ലെങ്കിൽ ദീർഘകാല 4 ° C ക്രയോപ്രെസർവ്ഡ് എന്നിവ ഒഴിവാക്കുക.

Pri പ്രൈമറുകളുടെ തെറ്റായ ഡിസൈൻ (ഉദാ: പ്രൈമർ ദൈർഘ്യം പോരാ

A-3 Mg²⁺ഏകാഗ്രത

G എംജി²⁺ ഏകാഗ്രത വളരെ കുറവാണ് —— Mg കൃത്യമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുക²⁺ഏകാഗ്രത: Mg ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക²⁺ ഒപ്റ്റിമൽ Mg നിർണ്ണയിക്കാൻ 0.5 mM ഇടവേളയിൽ 1 mM മുതൽ 3 mM വരെയുള്ള പ്രതികരണങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പരയിലൂടെ ഏകാഗ്രത²⁺ ഓരോ ടെംപ്ലേറ്റിനും പ്രൈമറിനുമുള്ള ഏകാഗ്രത.

A-4 അനിയലിംഗ് താപനില

An ഉയർന്ന അനിയലിംഗ് താപനില പ്രൈമറിന്റെയും ടെംപ്ലേറ്റിന്റെയും ബൈൻഡിംഗിനെ ബാധിക്കുന്നു. —— അനിയലിംഗ് താപനില കുറയ്ക്കുകയും 2 ° C ഗ്രേഡിയന്റ് ഉപയോഗിച്ച് അവസ്ഥ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുകയും ചെയ്യുക.

A-5 വിപുലീകരണ സമയം

Extension ഹ്രസ്വ വിപുലീകരണ സമയം —— വിപുലീകരണ സമയം വർദ്ധിപ്പിക്കുക.

ചോദ്യം: തെറ്റായ പോസിറ്റീവ്

പ്രതിഭാസം: നെഗറ്റീവ് സാമ്പിളുകളും ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസ് ബാൻഡുകൾ കാണിക്കുന്നു.

പിസിആറിന്റെ എ -1 മലിനീകരണം

Target ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസ് അല്ലെങ്കിൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ ക്രോസ് മലിനീകരണം —— നെഗറ്റീവ് സാമ്പിളിൽ ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസ് അടങ്ങിയ സാമ്പിൾ പൈപ്പ് ചെയ്യരുത് അല്ലെങ്കിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിൽ നിന്ന് പുറത്തേക്ക് ഒഴിക്കരുത്. നിലവിലുള്ള ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ ഇല്ലാതാക്കാൻ റിയാക്ടറുകളോ ഉപകരണങ്ങളോ ഓട്ടോക്ലേവ് ചെയ്യണം, കൂടാതെ നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണ പരീക്ഷണങ്ങളിലൂടെ മലിനീകരണത്തിന്റെ അസ്തിത്വം നിർണ്ണയിക്കണം.

Ag റിയാജന്റ് മലിനീകരണം —— റിയാക്ടറുകളോട് ചേർന്ന് കുറഞ്ഞ താപനിലയിൽ സൂക്ഷിക്കുക.

എ -2 പ്രൈംr

G എംജി²⁺ ഏകാഗ്രത വളരെ കുറവാണ് —— Mg കൃത്യമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുക²⁺ ഏകാഗ്രത: Mg ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക²⁺ ഒപ്റ്റിമൽ Mg നിർണ്ണയിക്കാൻ 0.5 mM ഇടവേളയിൽ 1 mM മുതൽ 3 mM വരെയുള്ള പ്രതികരണങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പരയിലൂടെ ഏകാഗ്രത²⁺ ഓരോ ടെംപ്ലേറ്റിനും പ്രൈമറിനുമുള്ള ഏകാഗ്രത.

Pri തെറ്റായ പ്രൈമർ ഡിസൈൻ, ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസിന് നോൺ-ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസുമായി ഹോമോളജി ഉണ്ട്. —— പ്രൈമറുകൾ വീണ്ടും രൂപകൽപ്പന ചെയ്യുക.

ചോദ്യം: നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ

പ്രതിഭാസം: പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബാൻഡുകൾ പ്രതീക്ഷിക്കുന്ന വലുപ്പവുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നില്ല, വലുതോ ചെറുതോ അല്ലെങ്കിൽ ചിലപ്പോൾ നിർദ്ദിഷ്ട ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബാൻഡുകളും നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബാൻഡുകളും സംഭവിക്കുന്നു.

എ -1 പ്രൈമർ

Pri മോശം പ്രൈമർ പ്രത്യേകത

—— റീ-ഡിസൈൻ പ്രൈമർ.

Mer പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ വളരെ കൂടുതലാണ് —— ഡിനാറ്ററേഷൻ താപനില കൃത്യമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ഡിനാറ്ററേഷൻ സമയം ദീർഘിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

A-2 Mg²⁺ ഏകാഗ്രത

എംജി²⁺ ഏകാഗ്രത വളരെ കൂടുതലാണ് —— Mg2+ ഏകാഗ്രത ശരിയായി കുറയ്ക്കുക: Mg ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക²⁺ ഒപ്റ്റിമൽ Mg നിർണ്ണയിക്കാൻ 0.5 mM ഇടവേളയിൽ 1 mM മുതൽ 3 mM വരെയുള്ള പ്രതികരണങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പരയിലൂടെ ഏകാഗ്രത²⁺ ഓരോ ടെംപ്ലേറ്റിനും പ്രൈമറിനുമുള്ള ഏകാഗ്രത.

എ -3 തെർമോസ്റ്റബിൾ പോളിമറേസ്

En അമിതമായ എൻസൈം തുക —— 0.5 U ഇടവേളകളിൽ ഉചിതമായ എൻസൈം തുക കുറയ്ക്കുക.

A-4 അനിയലിംഗ് താപനില

Ne അനിയലിംഗ് താപനില വളരെ കുറവാണ് —— അനുചിതമായ താപനില വർദ്ധിപ്പിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ രണ്ട്-ഘട്ട അനിയലിംഗ് രീതി സ്വീകരിക്കുക

A-5 PCR സൈക്കിളുകൾ

P വളരെയധികം PCR സൈക്കിളുകൾ —— PCR സൈക്കിളുകളുടെ എണ്ണം കുറയ്ക്കുക.

ചോദ്യം: പാച്ചിയോ സ്മിയർ ബാൻഡുകളോ

എ -1 പ്രൈമർ———————————————————————————————————————————————————————————————————— അല്ലെങ്കിൽ കൂടുകൂട്ടിയ PCR നടത്തുക.

എ -2 ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ

ടെംപ്ലേറ്റ് ശുദ്ധമല്ല - ടെംപ്ലേറ്റ് ശുദ്ധീകരിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ ഡിഎൻഎയെ ശുദ്ധീകരണ കിറ്റുകൾ ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിച്ചെടുക്കുക.

A-3 Mg²⁺ ഏകാഗ്രത

——Mg²⁺ ഏകാഗ്രത വളരെ കൂടുതലാണ് —— Mg ശരിയായി കുറയ്ക്കുക²⁺ ഏകാഗ്രത: Mg ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക²⁺ ഒപ്റ്റിമൽ Mg നിർണ്ണയിക്കാൻ 0.5 mM ഇടവേളയിൽ 1 mM മുതൽ 3 mM വരെയുള്ള പ്രതികരണങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പരയിലൂടെ ഏകാഗ്രത²⁺ ഓരോ ടെംപ്ലേറ്റിനും പ്രൈമറിനുമുള്ള ഏകാഗ്രത.

A-4 dNTP

——DNTP- യുടെ സാന്ദ്രത വളരെ കൂടുതലാണ് —— dNTP- യുടെ സാന്ദ്രത ഉചിതമായി കുറയ്ക്കുക

A-5 അനിയലിംഗ് താപനില

—— വളരെ കുറഞ്ഞ അളവിലുള്ള താപനില —— അനുബന്ധ താപനില ഉചിതമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുക

എ -6 സൈക്കിളുകൾ

—— വളരെയധികം സൈക്കിളുകൾ —— സൈക്കിൾ നമ്പർ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക

ചോദ്യം: 50 μl പിസിആർ പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിൽ എത്ര ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ ചേർക്കണം?

ചോദ്യം: നീളമുള്ള ശകലങ്ങൾ എങ്ങനെ വർദ്ധിപ്പിക്കാം?

ഉചിതമായ പോളിമറേസ് തിരഞ്ഞെടുക്കുക എന്നതാണ് ആദ്യപടി. 3'-5 'എക്സോ ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനത്തിന്റെ അഭാവം മൂലം റെഗുലർ ടാക് പോളിമറേസിന് പ്രൂഫ് റീഡ് ചെയ്യാൻ കഴിയില്ല, കൂടാതെ പൊരുത്തക്കേട് ശകലങ്ങളുടെ വിപുലീകരണ കാര്യക്ഷമതയെ ഗണ്യമായി കുറയ്ക്കും. അതിനാൽ, സാധാരണ ടാക് പോളിമറേസിന് 5 കെബിയിൽ കൂടുതലുള്ള ടാർഗെറ്റ് ശകലങ്ങൾ ഫലപ്രദമായി വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയില്ല. വിപുലീകരണ കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനും നീണ്ട ശകലങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനും പ്രത്യേക പരിഷ്ക്കരണങ്ങളോ മറ്റ് ഉയർന്ന വിശ്വാസ്യതയുള്ള പോളിമറേസുകളോ ഉള്ള ടാക് പോളിമറേസ് തിരഞ്ഞെടുക്കണം. കൂടാതെ, നീളമുള്ള ശകലങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് പ്രൈമർ ഡിസൈൻ, ഡീനാറ്ററേഷൻ സമയം, എക്സ്റ്റൻഷൻ സമയം, ബഫർ പിഎച്ച്, മുതലായവ ക്രമീകരിക്കേണ്ടതുണ്ട്. ടെംപ്ലേറ്റ് കേടുപാടുകൾ തടയുന്നതിന്, 94 ° C ലെ ഡീനാറ്ററേഷൻ സമയം ഓരോ ചക്രത്തിലും 30 സെക്കന്റോ അതിൽ കുറവോ ആയി കുറയ്ക്കണം, ആംപ്ലിഫിക്കേഷന് മുമ്പ് താപനില 94 ° C ആയി ഉയർത്താനുള്ള സമയം 1 മിനിറ്റിൽ കുറവായിരിക്കണം. കൂടാതെ, വിപുലീകരണ താപനില ഏകദേശം 68 ° C ആയി ക്രമീകരിക്കുകയും 1 kb/min എന്ന നിരക്കനുസരിച്ച് വിപുലീകരണ സമയം രൂപകൽപ്പന ചെയ്യുകയും ചെയ്താൽ നീണ്ട ശകലങ്ങളുടെ ഫലപ്രദമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉറപ്പാക്കാനാകും.

ചോ: പിസിആറിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ വിശ്വസ്തത എങ്ങനെ മെച്ചപ്പെടുത്താം?

ഉയർന്ന വിശ്വാസ്യതയുള്ള വിവിധ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസുകൾ ഉപയോഗിച്ച് പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ പിശക് നിരക്ക് കുറയ്ക്കാൻ കഴിയും. ഇതുവരെ കണ്ടെത്തിയിട്ടുള്ള എല്ലാ Taq DNA പോളിമറേസുകളിലും Pfu എൻസൈമിന് ഏറ്റവും കുറഞ്ഞ പിശക് നിരക്കും ഏറ്റവും ഉയർന്ന വിശ്വസ്തതയും ഉണ്ട് (അറ്റാച്ചുചെയ്ത പട്ടിക കാണുക). എൻസൈം തിരഞ്ഞെടുപ്പിന് പുറമേ, ബഫർ കോമ്പോസിഷൻ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക, തെർമോസ്റ്റബിൾ പോളിമറേസ് ഏകാഗ്രത, പിസിആർ സൈക്കിൾ നമ്പർ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക എന്നിവയുൾപ്പെടെയുള്ള പ്രതികരണ സാഹചര്യങ്ങൾ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുന്നതിലൂടെ ഗവേഷകർക്ക് പിസിആർ മ്യൂട്ടേഷൻ നിരക്ക് കുറയ്ക്കാനാകും.

നിങ്ങളുടെ സന്ദേശം ഇവിടെ എഴുതി ഞങ്ങൾക്ക് അയയ്ക്കുക

ഉൽപ്പന്ന വിഭാഗങ്ങൾ

എന്തുകൊണ്ടാണ് ഞങ്ങളെ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നത്

സ്ഥാപിതമായതുമുതൽ, ഞങ്ങളുടെ ഫാക്ടറി തത്ത്വം പാലിച്ച് ഒന്നാം ലോകോത്തര ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വികസിപ്പിച്ചുകൊണ്ടിരിക്കുകയാണ്
ആദ്യം ഗുണമേന്മയുള്ള. ഞങ്ങളുടെ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വ്യവസായത്തിൽ മികച്ച പ്രശസ്തിയും പുതിയതും പഴയതുമായ ഉപഭോക്താക്കൾക്കിടയിൽ മൂല്യനിർണ്ണയം നേടിയിട്ടുണ്ട്.

അന്വേഷണം